国产av日韩a∨亚洲av电影,chinese体育生打飞j视频,娇妻系列交换27部多p在线观看,日韩丰满少妇无码内射

當(dāng)前位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  細(xì)胞凍存『掃雷指南』,這些關(guān)鍵點(diǎn)必看!

細(xì)胞凍存『掃雷指南』,這些關(guān)鍵點(diǎn)必看!

更新時(shí)間:2022-12-26  |  點(diǎn)擊率:930

細(xì)胞凍存

細(xì)胞凍存是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)常規(guī)步驟,是細(xì)胞保存的重要方法之一。將細(xì)胞低溫保存在-196℃液氮中,使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而進(jìn)入休眠階段,以便日后復(fù)蘇重新培養(yǎng)擴(kuò)增。

細(xì)胞凍存方法

細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn),在往期文章中也有提到

保姆級(jí)細(xì)胞凍存方法

看似簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),仍有一些關(guān)鍵點(diǎn)需要格外留意,切莫踩到“雷區(qū)",造成“實(shí)驗(yàn)大翻車"。

凍存操作前:

選擇長(zhǎng)勢(shì)良好、存活率高,且生長(zhǎng)密度在80%—90%的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雜質(zhì)檢測(cè):是否有雜細(xì)胞或者支原體等雜質(zhì)。

這里推薦使用MB支原體常規(guī)法PCR檢測(cè)試劑盒,非定量檢測(cè),常規(guī)PCR即可滿足需求,方便快捷,靈敏度高。

所用凍存試劑DMSO應(yīng)為分析級(jí),避光儲(chǔ)存。

凍存前一日,對(duì)需保存的細(xì)胞進(jìn)行換液處理。

凍存操作

配制凍存培養(yǎng)基(常規(guī)含量):DMSO含量5-10%,血清含量20%左右。

用凍存培養(yǎng)基將離心后的細(xì)胞進(jìn)行重懸。

分裝至無(wú)菌凍存管中。

梯度降溫:

4℃ 10 分鐘

?

-20℃ 30 分鐘

?

-80℃ 16~18 小時(shí)

?

液氮

或?qū)⒀b有細(xì)胞的凍存管,置于程序降溫盒中,放入-80℃冰箱中,一天后轉(zhuǎn)移至液氮中。

液氮的液相儲(chǔ)存與氣相儲(chǔ)存

一般認(rèn)為:-196℃的液氮,對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的細(xì)胞而言,是一比較合適的環(huán)境。因此,我們會(huì)將裝有細(xì)胞的凍存管,放入專用的方形凍存盒中,再裝進(jìn)液氮罐配套的提籃提籃中,浸入液氮的液相中進(jìn)行保存。

但在液相中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,容易面臨以下問(wèn)題:

如果凍存管在罐內(nèi)密封不嚴(yán),則會(huì)引起液氮滲入管內(nèi),灌滿整個(gè)樣品管,造成樣品的污染。不僅如此,在取出凍存管的時(shí)候,液氮沸騰氣化使管內(nèi)氣壓升高,發(fā)生炸裂,容易傷到實(shí)驗(yàn)人員。

因此,有人提出,可以將細(xì)胞置于液氮的氣相中進(jìn)行儲(chǔ)存。

液氮罐內(nèi)溫度較比液相儲(chǔ)存高,一般在-135℃至-190℃,對(duì)于細(xì)胞儲(chǔ)存而言,該溫度也符合要求,但在實(shí)際操作過(guò)程中,也存在一定弊端:

與液相液氮罐相比,氣相液氮罐,在相同體積的液氮中保存時(shí)間更短,需對(duì)液氮罐內(nèi)的溫度進(jìn)行監(jiān)控,及時(shí)補(bǔ)充液氮來(lái)維持罐內(nèi)溫度。

所以,應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)條件等情況,合理選擇液相儲(chǔ)存或是氣相儲(chǔ)存。在正確操作的前提下,這兩者都能達(dá)到比較好的凍存效果


欧美黑人巨大xxxxx| 免费男人下部进女人下部视频 | 性xxxx欧美老妇胖老太肥肥| 成人国内精品久久久久影院| 疯狂做受xxxx国产| 无码精品国产一区二区三区免费| 国产无人区玫瑰香水| 18禁美女挤奶视频免费观看| 亚洲午夜久久久久久噜噜噜| 人与嘼AV免费| 给我免费的片观看| 国产成人精品一区二三区在线观看 | 久久精品九九亚洲精品| 欧美精品精品一区在线发布 | 亚洲精品一区中文字幕乱码| 好吊视频一区二区三区| 精品国产三级在线观看| 欧美激情AAAAAAAA片| 国精品无码一区二区三区在线| 精品国产一区二区三区久久影院| 97人妻一区二区精品免费| 蜜桃视频在线观看| 国产精品久久久久久久久无码 | 欧美13一14娇小性| 欧美激情在线视频| 欧洲无码精品A码无人区| 少妇把腿扒开让我添69式| 51福利国产在线观看午夜天堂| 国产精品无码AV无码| 最近2019好看的中文字幕免费| 免费追剧大全电视剧网站影视大全| 国产啪亚洲国产精品无码| 日韩精品人妻系列无码专区免费| 日产乱码一二三区别免费一| 久别的草原在线看视频免费| 最近中文字幕高清免费MV| 日本熟妇50岁hd| 亚洲欧洲无码AV电影在线观看| 色国产精品一区在线观看| 最好看2019高清中文字幕视频 | 野花日本免费完整版高清版|