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細(xì)胞凍存后如何復(fù)蘇?

更新時(shí)間:2021-10-13  |  點(diǎn)擊率:1029

細(xì)胞復(fù)蘇是一簡單的試驗(yàn)操作,但操作中有許多需要注意的事項(xiàng),在實(shí)驗(yàn)操作中注意細(xì)小問題,才能使復(fù)蘇后的細(xì)胞狀態(tài)保持良好?,F(xiàn)將細(xì)胞復(fù)蘇的操作程序和注意事項(xiàng)總結(jié)如下。

1. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)消毒,紫外照射30 min以上,超凈臺開啟通風(fēng)10 min。

2. 將新鮮培養(yǎng)基置于37℃恒溫水浴鍋中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭,移入無菌操作臺內(nèi)。將10 ml左右新鮮培養(yǎng)基移入無菌細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,備用。

3. 從液氮保存罐中取出凍存管,立即放入40℃水浴中,輕搖冷凍管使其在快速全部融化,以70 % 酒精擦拭凍存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。

4. 將細(xì)胞懸液移入已加培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,放CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5. 待細(xì)胞貼壁后(根據(jù)細(xì)胞種類貼壁時(shí)間不同,一般4小時(shí)左右),棄去含有冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基,加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

【注意事項(xiàng)】

1. 取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。

2. 常溫下二甲基亞砜(DMSO)對細(xì)胞的毒副作用較大,因此,必須在1~2 min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)蘇溫度太低,會造成細(xì)胞的損傷,所以選擇40℃復(fù)蘇。

3. 貼壁細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)流程是將解凍后的細(xì)胞懸液先進(jìn)行離心,以去除冷凍保護(hù)液DMSO對細(xì)胞的損傷,但是離心也會對剛復(fù)蘇的狀態(tài)欠佳的細(xì)胞產(chǎn)生損傷。也有的實(shí)驗(yàn)操作是將解凍后的細(xì)胞懸液先直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。這可能使培養(yǎng)基中少量的DMSO對細(xì)胞造成損傷。

科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

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它在國內(nèi)市場經(jīng)歷十幾年,被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇,也是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的供應(yīng)品牌.


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